产品规格：
产品名称 |
产品编号 | 规格 | 目录价 |
NanoLuc live-cell monitoring substrate | NLS001 | 0.1 mL | 680 元
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NLS002 | 1 mL | 3800 元 |
¢ 产品简介
本产品用于NanoLuc或NanoBiT报告基因的活细胞检测，检测时长可维持数小时或数天。该底物由细胞酯酶催化，发生缓慢的酯水解反应生成呋喃嗪，由于酯水解反应速率较为缓慢，因此整个实验过程中呋喃嗪稳定释放，进而被NanoLuc或NanoBiT荧光素酶持续催化发光。通过仪器测定发光信号可实现活细胞的动态检测。
¢ 保存条件
-20℃或-80℃避光保存，6个月有效。使用时建议分装避免反复冻融。
¢ 使用说明
1. 细胞制备：
贴壁细胞：
（1）在白色96孔板中接种表达NanoLuc或NanoBiT荧光素酶的细胞，推荐细胞数量为1w个/孔（每孔100μL）。为了尽可能减少蒸发或热梯度的影响，建议仅使用 96 孔板内部的 60 个孔，并添加 200 μL无菌培养基或 PBS 至外部的 36 个孔，添加 100 μL 无菌培养基或 PBS 至孔间。
（2）将培养有细胞的96孔板放入 37℃，5% CO2 培养箱中过夜孵育。
悬浮细胞：
（1）在白色 96 孔组织培养板中将表达 NanoLuc 或 NanoBiT 萤光素酶的细胞铺板。为了尽可能减少蒸发或热梯度的影响，建议仅使用 96 孔板内部的 60 个孔，并添加 200 μL无菌培养基或 PBS 至外部的 36 个孔，添加 100 μL 无菌培养基或 PBS 至孔间。
注意：
1. 对于多天的发光测量，如果细胞在整个实验过程中生长，请以低细胞密度对贴壁细胞进行铺板。
2. 对于瞬时表达和多日发光测量，建议使用批量转染方案，然后重新铺板。
2. 底物添加：
（1）用细胞培养基将底物稀释 200 倍混合，配成底物工作液。
（2）对于贴壁细胞，从组织培养板中吸出原来培养基，并替换为200μL底物工作液。对于悬浮细胞，以130×g离心10分钟收集细胞沉淀，然后使用底物工作液以所需的细胞密度重悬细胞沉淀。
注意：
1. 推荐使用带有缓冲的培养基，例如HEPES以维持检测过程中的生理pH。若发光检测仪带有CO2控制装置，则可勿略。
2. 稀释后的底物不可长期保存，建议现配现用。
3. 对于贴壁细胞，加入液体时应沿着孔侧面缓慢添加，以避免细胞脱落。
3. 检测发光：
加入底物工作液后，即可进行发光检测，或在多个时间点连续进行发光检测。曝光时间可设置为0.5-2秒。
注意：
1. 整个板的热梯度将是孔间差异的来源。
2. 当培养基中存在10% FBS时，可能会影响furimazine发光。
3. 信号强度和稳定性会随着实验条件不同而发生变化，在发光水平高时，由于酶周转增加和Furimazine底物的损失，信号衰减速率会增加。
4. 对于表达低水平NanoLuc 或 NanoBiT 萤光素酶时，应在实验中设置对照孔，以测量自发光随时间的变化，且对照孔周围应是空白孔，以防止信号溢出。
4. 数据处理：
对于测试化合物或对照化合物处理，建议设置溶剂对照，以确定某一给定处理的特异效果。还可在添加测试化合物或对照处理之前，基于时间点将每个孔的数据归一化。对每个孔进行归一化可减少重复孔之间的差异。此差异是由铺板细胞的数量、转染效率、吸液步骤中的细胞丢失等方面的孔间差异造成的。
¢ 注意事项
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验数据：
